【检测原理】

本试剂盒基于公司科研团队诸多创新性成果，针对快速检测需求，实现在恒定温度条件下的快速检测，通过配套机器食源性检测仪快速判读结果。

【预期用途】

用于食源性快速检测和筛查。

【产品特点】
1. 反应速度快，上机检测仅需 40 min。
2. 灵敏度高，本试剂盒最低检测限为103CFU/mL，可检测低至5‰源性成分。

【试剂组成】

【实验需要的器材】

食源性快速检测仪、均质袋、涡旋振荡器、恒温水浴锅、离心机、2-20μl移液器、20-200μl 移液器、1.5ml离心管、96孔板、200μL PCR反应管。

【实验前准备】

1、将食源性快速检测仪通电并开机；将涡旋振荡器、离心机通电等待使用；

2、将快速释放剂、试剂预混液、生物酶、阳性对照从冰箱取出恢复至室温。试剂预混液自然解冻后涡旋混匀，瞬时离心待用。

3、取出1.5ml离心管、200μl PCR反应管、96孔板冰盒，0.45μm滤膜若干。

【样品前处理】

实验器具必须洁净并使用一次性吸头（每次取试剂前及时更换新的吸头），以避免污染干扰实验结果！！！

1、样本处理：

    对样本进行多位点采集，总采集量为1-3g,将样本与500－1000μl纯净水置入样品采样袋/均质袋进行研磨均质操作。

2、样本快速释放：

   从均质袋中采集200μl混合液体加入离心管中，再将200μL快速释放剂加入离心管中，涡旋震荡混匀，瞬时离心，使用恒温水浴锅100℃条件下热浴10分钟。热浴完成后离心，管内上清液体即为待检测样本。注意：煮沸时，离心管应封闭完整，防止崩开。

3、注意事项

    整个采样、样本处理过程中，采集、处理不同样本时，应及时更换手套及移液器吸头，以避免造成交叉污染！移液器使用过程中，需轻按轻放，避免造成因吸力过大污染移液器腔体。

【实验步骤】

1、取 n 个反应管（n=样本数+阳性对照1+阴性对照1），单个反应体系配制如下：

2、用移液器在一个新的 1.5 mL 离心管中加入上述试剂，涡旋混匀后瞬时离心。离心后将混匀后的试剂分装在n个PCR反应管中，每管20μl。

3、在上述n个PCR反应管中，用移液器在一个反应管中加入阴性对照（纯水即可）5μl，更换吸头后在下一反应管加入阳性对照（红盖管）5μl，再次更换吸头后在下一反应管中加入待检样本5μl，每次加样均需更换吸头。每管所得反应总体积为25μl。盖紧管盖，瞬时离心。（吸取及加样时注意不要产生明显气泡）；

4、将准备好的PCR反应管，放置到检测设备中，按照检测程序63℃检测40min。

5、将检测管放入仪器后，点击检测，开始检测。检测过程中，可同时点击页面上“图谱”观察各检测孔曲线变化。

6、结果判定，反应结束后，仪器自动给出样品检测Ct值，根据Ct值及是否有标准S型曲线判断样本阴阳性，阳性即含有源性成分。

7、反应结束后，将反应后试剂放置于指定位置及时处理，不可灭菌处理，不可打开管盖。

【注意事项及安全提示】
1. 使用本试剂盒前请仔细阅读说明书。不同批号的产品请勿混合使用，避免反复冻融，请在有效期内使用试剂盒，由于操作不当引起的误判，以及由此误判引发的其他事项，本公司概不负责。
2. 检测空间应严格分区操作，在空间条件允许情况下，试剂配置区用于配置反应所需要的所有试剂；样品前处理区用于待测样品的处理及加样；扩增观察区用于反应进行和结果判读。各区内空间独立，试验用品专用，避免交叉污染。另外，样品处理区建议配备超净工作台，所有步骤严格按照说明书的要求进行。
3.加样时应尽量避免产生气泡，反应前注意观察反应管是否盖紧，以免泄露，造成污染。实验中所使用的离心管、吸头应保证无菌、无污染。试剂盒内阳性对照应视为具有污染性物质，应避免污染其它样本和反应试剂，导致错误检测结果。
4. 检测过程中建议穿洁净工作服，带一次性手套，使用的枪头需提前灭菌。
5. 阳性对照可能会作为污染源，污染其他试剂和待检样品，导致出现假阳性结果，在加样过程中建议最后加入阳性对照。
6. 上机前注意检查反应管是否盖紧，以免泄漏污染仪器。在反应结束后切忌开盖，以防气溶胶污染。
7. 试剂盒使用完毕废弃时按照废弃物相关规定处理，由使用者自行负责处理。
8. 工作台及各物品定期用 1%次氯酸钠、75%酒精或紫外灯处理。

【贮存方法及有效期】

1、本品应贮存在温度-20℃范围内

2、有效期12个月

3、生产日期见盒装标签

【厂家信息】

厂家名称： 冠宇仪器制造（江苏）有限公司

电话： 400-966-7696

地址： 盐城市盐南高新区科城街道科技路20号宏洲智能科技园6号楼4层

网址： http://guanyuinstr.com